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【摘要】 目的 构建针对BALB/C小鼠H2Kd基因siRNA表达质粒，观察其在小鼠LAK细胞的表达，为进一步研究H2Kd基因功能奠定基础。方法 设计siRNA干涉靶序列，体外合成两段互补的寡核苷酸，通过与线性化的pSilencer 3.0H1连接,转化大肠杆菌DH5a扩增纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列。采用siRNA表达质粒封闭小鼠LAK细胞MHCI（H2Kd）的表达，同时设空转染组和无关序列组，流式细胞术检测不同组别靶蛋白的表达。结果 纯化的质粒分子量为2.8?Kb,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符, 流式细胞术检测证实siRNA能够抑制靶蛋白的表达。结论 成功构建了针对H2Kd基因的siRNA表达质粒并抑制了其表达。
作者：庄学伟，夏西燕，单宁宁 王洪春， 张义，杨晓静，李晓丽，赵胜梅，邹雄
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【摘要】 目的 探讨重组鼠血管内皮生长因子（rrVEGF165）对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后血清中内皮抑素（ES），脑源性神经营养因子（BDNF）及脊髓组织中相应受体酪氨酸激酶B（TrkB）表达的影响。方法 将Wistar大鼠48只随机分为假手术组（S组，n=8），模型组（M组，n=24）和治疗组（V组，n=16）。腹主动脉阻断90?min后再开放建立脊髓缺血再灌注模型。HE染色观察脊髓组织病理学变化，ELISA法检测血清ES和BDNF水平，RTPCR法检测组织中TrkB受体mRNA表达水平。结果 与模型组相比，再灌注后治疗组的病理状况得到明显改善。血清学检查以假手术组为对照值。ES水平：M组再灌注后6?h开始升高（P＜0.05）并持续至7?d达高峰（P＜0.01）；V组虽再灌注6?h也有升高（P＜0.05），但7d时基本维持该水平，没有进一步升高。BDNF水平：M组再灌注6?h降低（P＜0.01），2?d回升至对照水平；随后再度下降，7?d时降至最低，仅为对照水平的59.1%（P＜0.01）,且明显低于再灌注6?h（P＜0.01）；V组再灌注6?h明显升高（P＜0.01），7?d时恢复至对照水平。TrkB受体mRNA表达：M组再灌注6?h有所上调但2d时回调至对照水平，并于随后继续下调,至7?d时表达最低；V组则于6?h、7?d均保持高表达（P＜0.01），并显著高于模型组（P＜0.01）。结论 外源性rrVEGF165能显著降低大鼠脊髓缺血再灌注后血清ES的升高，减轻BDNF的降低，促进BDNF受体TrkB mRNA的高表达，改善缺血再灌注后的脊髓病理损伤。
作者：姜丽,于灵芝,刘旭东,郭兰敏
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【摘要】 目的 观察P物质（SP）及其受体NK1R介导的神经源性炎症在小鼠免疫性肝炎发病中的作用和可能机制。方法 小鼠尾静脉注射刀豆蛋白A（Con A）建立免疫性肝炎模型组，注射生理盐水作为对照组。HE染色观察肝脏病理变化；肝组织匀浆SP测定采用酶联免疫吸附(ELISA)法；同时应用RTPCR法对各组动物肝脏组织中NK1RmRNA的表达水平进行相对定量比较。结果 模型组肝脏损害严重，以肝细胞肿胀和免疫细胞浸润为特征；肝组织匀浆SP含量模型组(507.25±30.35) 显著高于对照组 (238.59±21.90) (P＜0.01)；而且模型组NK1R mRNA的表达显著上调（P＜0.05）。结论 P物质及其受体参与了小鼠免疫性肝炎的起始阶段，并在炎症的激发和扩大方面发挥了重要作用。
作者：张海涛，阎明，商楠，刘慧敏，张玉泉
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【摘要】 目的 观察不同浓度极低密度脂蛋白(VLDL)对肾小管上皮细胞（HK2 细胞）人尿酸盐转运蛋白（hOAT1）mRNA表达的影响。方法 根据培养液中所含VLDL浓度的不同，将HK2 细胞分为：① 单纯采用DMEM培养基组（对照组）；② DMEM培养基+50?μmol/L VLDL组（V1组）；③ DMEM培养基+400?μmol/L VLDL组（V2组）。每组培养6瓶细胞，在不同培养液中分别培养48?h。采用实时荧光定量PCR检测HK2细胞中hOAT1mRNA 的相对表达量（2-ΔΔCt 法）。结果 所有标本均能检测到hOAT1的表达，且V1组hOAT1 mRNA表达量为对照组的41.6%，V2组为对照组的34.5%。两组与对照组间差异有统计学意义（P＜0.05），但两组间差异无统计学意义（P=0.927）。结论 VLDL可下调hOAT1mRNA的表达，可能与脂代谢紊乱易合并高尿酸血症有关。
作者：李成乾,赵家军,王霞,李长贵,苗志敏
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【摘要】 目的 观察酶酚酸酯(MMF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经功能改善及脑脊髓组织的影响。方法 用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的完全抗原免疫Wistar大鼠，制备EAE大鼠模型，以生理盐水和完全弗氏佐剂注射的Wistar大鼠作为对照。对照组大鼠7只，造模成功且存活的大鼠为25只，随机分为MMF大剂量组（n=8只）,MMF小剂量组（n=8只）,模型组（n=9只）。连续给药14?d，每天观察记录神经功能评分及体重变化，14?d后HE染色观察脑、脊髓组织病理变化。结果 EAE大鼠的造模成功率为72.1%。与对照组相比，各组EAE大鼠神经功能评分明显增加，体重明显下降(P＜0.01)，脑脊髓组织病理学变化主要表现为血管周围有大量炎细胞浸润；与模型组相比，用MMF治疗后神经功能评分有所下降，体重增加，病理表现有不同程度的减轻，且大剂量MMF疗效优于小剂量MMF(P＜0.01)。结论 MMF能改善EAE大鼠的症状，促进神经功能恢复，并具有剂量依赖性。
作者：由玮，毕建忠，谢兆宏，朱正禹，王晓云
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【摘要】 目的 观察支气管哮喘小鼠的血小板表面抗原P选择素表达的变化。方法 随机将雌性BALB/c小鼠20只分为：正常对照组、哮喘模型组；用流式细胞仪测定血小板膜上P选择素的阳性率。结果 正常对照组和哮喘组P选择素表达的阳性率分别为（1．23±1.02）%、（4.52±1.45）%，哮喘模型组P选择素较正常对照组增高，差异有统计学意义（P0.05）；正常对照组和哮喘组肺泡灌洗液中性粒细胞分别为（6.64±1.86）%、（25.60±2.66）%，差异有统计学意义（P
作者：王立生，张春玲，孙荣丽，李黎，肖宝红，武晓
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【摘要】 目的 探讨动脉粥样硬化进程中一氧化氮合酶/一氧化氮（NOS/NO）和血红素加氧酶/一氧化碳（HO/CO）系统的变化、相互关系以及辛伐他汀对该系统的影响。方法 16只家兔予以高胆固醇饮食喂养8周，停用高胆固醇饮食后，随机分为辛伐他汀组（n=8）和模型组（n=8）。辛伐他汀组喂饲辛伐他汀进行药物干预，继续给予普通饲料喂养8周；同时设正常对照组（n=8），给予普通饲料喂养16周。然后取静脉血和主动脉组织，分别用沉淀漂浮酶联法、Chalmers A H、硝酸还原酶法测定各实验组血中TC、TG、LDL、HDL、CO、 NO含量，免疫组织化学方法测定主动脉组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血红素加氧酶1（HO1）的表达水平；并比较两组间各项参数的差异。结果 8周末与对照组比较，模型组血脂水平明显升高,血清NO含量明显降低，血浆CO水平明显升高（P均＜0.01）。16周末与模型组比较，辛伐他汀组血浆TC、TG、LDL明显下降（P＜0.01）,HDL和血清NO含量明显升高（P＜0.01），血浆CO水平明显降低（P＜0.01），HO1及iNOS表达明显减少（P＜0.01）。结论 动脉粥样硬化进程中，HO/CO和NOS/NO系统显示出互补及代偿性调节作用，辛伐他汀可以通过下调HO/CO和NOS/NO系统而延缓动脉粥样硬化进程。
作者：刘同涛，于清霞，田庆印，孙春丽，李伯勤
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【摘要】 目的 研究siRNA干扰沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP2表达的影响 方法 体外化学合成肝素酶特异性小干扰RNA（siRNA），用脂质体2000转染至T24膀胱移行细胞癌细胞内，常规分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和转染实验组进行实验，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况，反转录聚合酶链法（RTPCR）检测肝素酶基因的表达，免疫细胞化学方法检测MMP2的表达。结果 RNA干扰沉默T24膀胱移行细胞癌细胞肝素酶基因后，T24细胞增殖活力下降，三个不同干扰组细胞活力分别下降了(28.55±3.66)%、(27.20±3.25)%和(37.29±4.82)%。肝素酶mRNA表达下降，膀胱移行细胞癌细胞中MMP2（明胶酶A）的表达亦明显下降（P均＜0.05）。结论 RNA干扰肝素酶基因后，细胞活力及肝素酶mRNA表达水平下降并且明显抑制膀胱癌细胞中MMP2的表达。
作者：张开舒，徐忠华，姜虹， 阎磊，周尊林，王荣，刘海南 范医东，刘照旭，郑宝钟，亓天伟
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【关键词】 癌，非小细胞肺；核苷酸切除修复交叉互补组基因蛋白；顺铂；化学疗法，辅助
作者：吴铭生,王苹,林俊豪,王谦,吴树明
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【摘要】 目的 建立研究小鼠Tim4功能的细胞模型。方法 常规分离小鼠腹腔巨噬细胞，RTPCR扩增Tim4全长基因片段，构建含Tim4全基因片段的真核表达载体pcDNA3.0Tim4, 通过BamHⅠ、HindⅢ双酶切及测序鉴定其正确性。利用脂质体将pcDNA3.0和pcDNA3.0Tim4分别转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7，通过G418加压筛选，建立稳定高表达Tim4的RAW264.7，并采用RTPCR、流式细胞术和免疫细胞化学染色法检测Tim4 mRNA和蛋白的表达水平。结果 RTPCR扩增产物经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，与pcDNA3.0连接构建的重组体经酶切和测序，结果与GenBank报道序列一致。RTPCR结果显示，RAW264.7T4细胞表达Tim4 mRNA的水平显著高于对照组，流式细胞术显示RAW264.7T4高水平表达Tim4蛋白，免疫细胞化学染色表明Tim4主要表达于胞膜。结论 成功构建了携载小鼠Tim4全基因的表达载体，并用该重组体建立了稳定高表达Tim4 mRNA和蛋白的小鼠巨噬细胞系，为进一步探讨Tim1与Tim4的相互作用及对免疫细胞功能的影响奠定基础。
作者：续力云，祁建妮，梁晓红，鞠瑛，孙汶生，张利宁，赵培庆，高立芬
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【摘要】 目的 探计对地钱愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养的条件。方法 用MSK2和MS培养基对地钱配子体进行愈伤组织诱导，运用模糊评判对MSK2培养基生长激素组合进行综合性状评价。结果 MSK2和MS（2?mg/L 6BA）均能诱导出地钱愈伤组织，其中MSK2的诱导效果较好。光照（3?000～8?000 lux）能有效地促进地钱愈伤组织生长。激素配比组合是0.5?mg/L 2,4D+2?mg/L NAA+2?mg/L 6BA适合于地钱细胞生长以及次生代谢生产。 结论 地钱愈伤组织的诱导成功和悬浮细胞培养条件的建立，为探索药用苔藓植物次生代谢产物生产提供新的途径以及对苔藓植物细胞规模化培养提供新的理论指导。
作者：尹德明，温学森，娄红祥
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【摘要】 目的 探讨益肾活血胶囊对同型半胱氨酸（Hcy）致兔动脉粥样硬化（AS）单核细胞趋化蛋白1（MCP1）基因表达及核因子κB（NFκB）活化的影响。方法 将40只新西兰兔随机分为正常组、模型组、益肾活血胶囊小剂量组、益肾活血胶囊大剂量组及西药（叶酸、维生素B6、维生素B12）组，除正常组外，其他组建立高Hcy血症及AS动物模型，然后分别给予相应的药物治疗。采用高效液相色谱技术检测血浆Hcy浓度、HE染色观察血管形态学变化、实时定量PCR检测动脉壁MCP1基因表达、Western blot分析核因子κB抑制因子α（IκBα）蛋白含量。结果 益肾活血胶囊和叶酸等维生素均可明显降低血浆Hcy水平（P＜0.01），抑制血管内膜增厚，下调腹主动脉MCP1基因表达（P＜0.01），增加IκBα蛋白含量（P＜0.01）。益肾活血胶囊大剂量组疗效明显优于小剂量组和西药组（P＜0.05）。结论 益肾活血胶囊可明显降低血浆Hcy水平，抑制Hcy诱导的动脉粥样硬化的形成，其机制可能与下调MCP1基因表达，抑制NFκB活化有关。
作者：刘粉叶，张继东，胡连海，来丽萍，杨发林
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【摘要】 目的 探讨牙周膜牵张成骨后实验动物移动牙牙髓中白细胞介素8( interlukin8, IL 8)表达的变化。方法 山东本地健康杂种犬15只，随机分为5组，每组3只。4个实验组，分别为加力2周组（A组）,加力后保持1周组（B组），加力后保持2周组（C组），加力后保持4周组（D组），一个对照组（E组）。拔除下颌双侧第二前磨牙，以单根的第一前磨牙作为移动牙，双根的第三前磨牙作为支抗牙，实验动物通过牙周膜牵张成骨快速移动牙齿，并分别在加力2周及加力后保持1、2、4周时结束实验，局麻下拔除移动牙，取出牙髓组织标本，采用ELISA夹心法测定移动牙牙髓中IL8的含量及其在矫治过程中的变化。结果 A组实验犬移动牙牙髓中IL8含量与E组相比显著增高，差异具有统计学意义（P0.05）。结论 牙周膜牵张成骨后IL8含量升高，加力停止2周后即恢复到正常水平，提示牙周膜可以快速牵张成骨,加快牙齿移动速度。
作者：张勇，叶静，郭新星，肖水清
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【摘要】 目的 探讨长期（3～6年）服用血脂康对陈旧性心肌梗死患者多个动脉弹性指标的影响。方法 选取25例长期服用血脂康的陈旧性心肌梗死患者作为血脂康组，选取25例从未用过调脂药物的陈旧性心肌梗死患者作为未用血脂康组，20例健康人作对照组，利用高频超声检测肱动脉内膜-中层厚度(IMT)，平均血管壁紧张度（MCWT），平均血流速度（Vm），平均剪切率（MSR），内皮依赖性血管舒张功能（FMD），利用动脉硬化诊断仪检测脉搏波速度（PWV）。结果 与未服用血脂康组相比,血脂康组治疗后肱动脉IMT、MCWT、PWV明显减低；Vm、MSR、FMD明显增加(P＜0.05)。结论 陈旧性心肌梗死患者长期应用血脂康可以改善动脉内皮舒张功能，改善动脉弹性。
作者：杜孝芝，黎莉，王秀荣，蒋桂花, 王媛媛，周风华，孟晓
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【摘要】 目的 研究西洛他唑对全脑缺血大鼠学习记忆功能及半胱氨酸天冬酶3(caspase3)表达的影响。方法 采用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组（n=8×1）、缺血模型组(n=8×7)和治疗组(n=8×7)。治疗组于缺血前6?h和2?h各灌胃给予西洛他唑(30?mg/kg)，以后每隔24?h重复给药，其他各组灌胃给予30%二甲基亚砜(30?mg/kg)。缺血模型组和治疗组于缺血10?min再灌注，6、12、24、48、72?h、5?d和7?d 7个亚组灌注后断头取脑, 采用免疫组织化学方法分析再灌注后不同时间点海马CA1区caspase3表达水平的变化。另取24只大鼠随机分为假手术组、缺血模型组及治疗组，每个亚组8只。应用Morris水迷宫对全脑缺血再灌注7?d的大鼠进行缺血后学习记忆功能的测定。结果 caspase3在假手术组极少见阳性表达；缺血模型组caspase3的表达于再灌注6?h增加，72?h达高峰，7?d接近正常；治疗组48?h、72?h、5?d和7?d亚组caspase3平均阳性细胞数明显低于缺血模型组(P＜0.05)；与假手术组比较，5?d之中缺血模型组和治疗组平均逃避潜伏期明显延长（P＜0.01)；与缺血模型组比较，前4?d治疗组平均逃避潜伏期明显缩短（P＜0.01)，第5天两组大鼠的平均逃避潜伏期差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 西洛他唑可以有效地抑制caspase3升高，这可能是西洛他唑改善缺血大鼠学习记忆功能的机制之一。
作者：李云,袁晓东，欧阳和中，张轶超，朱美蓉
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